苯基疏水色谱柱是一种基于苯基基团修饰的填料实现样品分离的色谱柱，广泛应用于生物大分子（如蛋白质、多肽）及芳香族化合物的分离分析。其核心原理在于苯基基团通过化学键合固定在硅胶或其他基质上，形成稳定的疏水层，利用疏水作用及π-π电子相互作用实现分离。
其分离效果依赖于盐浓度调控。高盐环境下，样品疏水区域暴露，与填料结合紧密；盐浓度降低时，疏水作用减弱，样品逐渐洗脱。此外，苯环与芳香族化合物之间可形成π-π相互作用，为含芳香环的化合物提供独t的选择性，尤其适用于分析带有吸电子基团的芳香化合物。
1、柱接头匹配与安装方向
确认色谱柱接头类型与仪器接口一致（如标准不锈钢接头、PEEK手紧接头），若不匹配，需使用适配的转接头（避免强行安装导致接头损坏）。
注意色谱柱流向：柱身上标注有“IN”（入口）和“OUT”（出口），安装时需与仪器流路方向一致（入口接泵/进样器，出口接检测器），反向安装会导致柱效下降。
2、排除气泡与平衡柱床
卸下色谱柱两端的堵头，立即将入口端连接到仪器管路（避免空气进入柱床），出口端先不接检测器，用低流速（如0.1-0.2mL/min）泵入保存溶剂或初始流动相，缓慢排出柱内气泡（观察出口端流出液，直至无气泡连续排出）。
连接出口端到检测器，逐步提高流速至实验流速（如1mL/min），用初始流动相平衡色谱柱（通常平衡10-20柱体积，直至基线稳定），确保固定相充分溶胀并达到平衡状态。
3、避免干柱与剧烈冲击
色谱柱安装前需保持湿润，严禁长时间暴露在空气中导致固定相干涸（若不慎干涸，需用低浓度有机溶剂缓慢冲洗，不可直接用高流速流动相冲击）。
安装过程中轻拿轻放，避免剧烈振动或撞击柱体，防止固定相塌陷或填充不均。
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