苯基疏水色谱柱是一种特殊的反相色谱柱,在化学分析和生物制药等领域应用广泛。从原理上看,苯基疏水色谱柱的固定相是通过碳链将苯基键合到硅胶基质上。苯环与芳香族化合物之间存在π-π电子相互作用,这使得它对含有芳香环的化合物具有独t的选择性,能增加这些化合物的保留能力。同时,连接苯环的碳链还赋予其一定的疏水性,使其能像传统的C18或C8柱一样,通过疏水作用保留非极性或弱极性化合物。
该色谱柱具有诸多优势。它对极性化合物具有独t的保留能力,能增强位置异构体分离能力,提供良好的峰形、超高的柱效、分离度和使用寿命,且具有优异的批次重现性。在分离芳香族化合物时,苯基柱的选择性与传统的C18或C8柱不同,对于某些化合物,如含有吸电子基团的芳香化合物,苯基柱的保留能力更强。例如,恒谱生phenyl苯基色谱柱的五氟代苯基硅烷键合在高纯硅胶基质上,结合杂化颗粒技术,具有很好的pH稳定性、优化的表面覆盖率等。
苯基疏水色谱柱的清洗与保存:
1、清洗色谱柱:实验结束后,为防止样品残留对色谱柱造成污染和损坏,需要对色谱柱进行清洗。首先用高比例有机溶剂(如乙腈、甲醇等)的流动相冲洗色谱柱,时间为15-30分钟,以去除残留在色谱柱中的样品成分。然后,逐渐过渡到纯有机溶剂,继续冲洗10-15分钟,进一步净化色谱柱。
2、保存色谱柱:清洗完成后,选择合适的保存方法。如果短时间内(如几天内)还会使用该色谱柱,可以将色谱柱浸泡在含有少量有机溶剂(如10-20%乙腈)的水中,以防止微生物滋生和色谱柱干燥。如果较长时间(如超过一周)不使用,建议将色谱柱用纯有机溶剂充满,密封两端,存放在阴凉、干燥的地方。