亲水色谱柱是一种专门设计用于分离亲水性和极性化合物的色谱柱。利用固定相上的亲水性基团与样品中的极性基团之间的相互作用,实现对极性化合物的有效分离。其工作原理基于亲水作用和可能的离子交换作用。在分离过程中,水相固定相上的亲水性基团与待分离物质中的极性基团发生相互作用,从而实现物质的分离和纯化。
1、选择合适的流动相
选择合适溶剂:流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水。酸碱液及缓冲液需经过滤后使用,以防止杂质影响分析结果。
更换频率:水相流动相需经常更换(一般不超过2天),防止长菌变质。
2、样品处理
样品过滤:采用过滤或离心方法处理样品,确保样品中不含固体颗粒。
样品溶解:用流动相或比流动相弱(若为反相柱,则极性比流动相大;若为正相柱,则极性比流动相小)的溶剂制备样品溶液。
3、色谱柱操作
保护柱使用:使用保护柱可以延长分析柱的使用寿命。
冲洗步骤:如所用流动相为含盐流动相,反相色谱柱使用后,先用水或低浓度甲醇水(如5%甲醇水溶液),再用甲醇冲洗。
4、设备操作规程
开机步骤:打开所有电源,待自检通过;在计算机中双击LC SOLUTION Lite图标,进入工作站。
设置仪器方法:主要为LC采集时间、泵总流速及各泵流速、检测器波长、柱温箱温度等;设置完成后,另存方法文件,并下载至设备。
基线平稳:点击图标(仪器开/关),系统开始运行,观察检测器基线变化,如果基线平直稳定不变,即认为接近平衡,可以调零等待。
进样分析:点击单次运行,编辑样品参数(样品名,方法文件名,数据存储路径—数据文件名,进样量等),点击确定后,样品进样。
数据处理:文件---打开数据文件---视图---峰表,则可以查看保留时间,峰高,峰面积等,之后用Excel做标准曲线,根据未知样品的峰面积求浓度。
关机步骤:分析结束后,更换洗液清洗流路系统(如用缓冲液,先用水清洗半小时),再有机溶剂清洗30分钟以上,最后用有机溶剂封存;停止系统运行,在实时分析工作站中,点仪器开/关键即停止所有单元工作;退出实时分析界面,再完q退出;关闭单元电源开关。