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离子交换色谱柱的优点及其保养方法

发布时间:2022-06-29浏览:270次
离子交换色谱是指离子交换色谱柱的固定相中含有带电基团,这些带电基团通过静电相互作用与样品中带相反电荷的离子结合,如果流动相中存在其它带相反电荷的离子,当样品进入色谱柱后,样品离子便与流动相离子相互竞争固定相表面的电荷位置,并因竞争力的差异使样品组分得到分离。
 
离子交换色谱柱的优点是:
 
1、具有开放性支持骨架,大分子可以自由进入和迅速扩散,故吸附容量大。
 
2、具有亲水性,对大分子的吸附不大牢固,用温和条件使可以洗脱,不致引起蛋白质变性或酶的失活。
 
3、多孔性,表面积大、交换容量大,回收率高,可用于分离和制备。
 
主要保养方法如下:
 
(1)首先在开始使用系统以前检查柱子有否微生物生长,否则柱子会堵塞,柱压会升高到无法接受的水平。然后,不接检测器,正向安装色谱柱,使用纯甲醇以0.6ml/min流速冲洗约5倍柱体积。
 
(2)再连接检测器,用纯甲醇以0.6ml/min流速冲洗约10倍柱体积。
 
(3)然后使用去离子水以0.6ml/min流速冲洗约10倍柱体积。
 
(4)最好再确保连接好保护柱(多使用相应柱制造商针对性提供的保护柱),再用选用的洗脱液以0.6ml/min流速平衡1h以上,进样检测。同样,若洗脱液中含有缓冲盐类,在用分析洗脱液平衡之前,先用不含缓冲盐的同比例洗脱液过渡,冲洗约10倍柱体积,避免缓冲盐在分析柱内析出。
 
(5)分析完毕,净化程序基本同C18柱,先用去离子水以0.6ml/min流速冲洗约20倍柱体积→然后用甲醇以0.6ml/min流速冲洗约10倍柱体积,纯甲醇饱和后→密封保存即可。(注意:一定要确保在柱子内没有缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下保存色谱柱。)
 
(6)长时间保存后重新使用,重复上述(1)~(5)即可。
 
(7)使用并正确处理完毕,入库保存于防尘环境下,登记备案。
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