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要想更好的使用丁基疏水色谱柱需留意以下事项

发布时间:2022-06-25浏览:270次
 
  丁基疏水色谱柱是一款以粒径为2.5um的,丁基键合无孔型亲水性聚合物基质为填充剂的疏水作用色谱柱。适用于蛋白质、单抗、酶等生物大分子的分离分析。由于和药物安全以及生产成本息息相关,对于重组蛋白药物(包括单抗)的非均一性分析变得越来越被重视。TSKgelButyl-NPR(4.6mmIDX3.5cm)已经上市超过20年了,它以对蛋白的高速、高分辨率的分离性能为广大客户提供了帮助。新上市的Butyl-NPR(4.6mmIDX10cm)色谱柱具有更高的分辨率,可以满足生物制药的研究人员对于HPLC色谱柱的分辨率和分离选择性的更高要求。
  采用具有适度疏水性的填料,以含盐水溶液作流动相,借助于溶质与固定相间的疏水相互作用实现分离的色谱方法。其保留机理与反相色谱基本相同,所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相强,多为低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色谱主要用于蛋白质的分离与纯化。
  丁基疏水色谱柱的使用注意事项:
  1、使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统,确保系统干净,不含任何缓冲盐和污染物。
  2、取用色谱柱时避免磕碰掉落。
  3、将丁基疏水色谱柱入口端连接到系统上,柱出口端先不要连接,色谱柱身上有箭头标明正确流向。
  4、在0.1mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱,然后在2分钟内将流速升至0.5mL/min。
  5、当溶剂均匀的从柱出口端流出,停流速,将色谱柱出口端接到系统检测器上(这样可以避免气泡进入检测系统,并且可快速达到基线平衡)。
  6、重启流速,按照步骤4的方法逐渐提高流速,至常规分析时所使用的流速。
  7、参考柱效测试报告中的方法,使用该流动相条件平衡色谱柱,通常需要使用5-10倍柱体积的流动相,直至压力与基线稳定。
  8、测试丁基疏水色谱柱柱效。如果没有柱效测试报告中的分析物,请厂家部门寻求支持,使用合适的浓度与进样量。柱效结果略低于柱效测试报告属正常情况。如结果明显偏低、峰形拖尾,提示色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态,需要进行故障排查。当使用2.1mm内径色谱柱时,建议优化系统以减少谱带展宽,包括:使用检测器微量流通池,减少进样器loop环体积,使用较小内径(如0.005''或0.12mm)的系统管路。并确保管路与丁基疏水色谱柱连接恰当、无死体积。当使用小颗粒填料(如2.5μm)短柱进行快速分离时,需要考虑以下因素:
  1、确保管路丁基疏水色谱柱连接恰当、无死体积,尽量优化系统减少谱带展宽;
  2、提高采样频率至10点/秒以上;
  3、较小粒径的色谱柱产生的柱压较高,而较小粒径要达到*色谱效率所需的线速度较高,请根据所用LC系统的实际情况调节流速;
  4、可使用较高的柱温来补偿小颗粒造成的压力升高,例如40?C。使用杂化颗粒反相色谱柱时,可使用45?C或更高。
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