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丁基疏水色谱柱其使用是很有讲究的

更新时间:2024-04-19浏览:941次
  丁基疏水色谱柱是一款以粒径为2.5um的,丁基键合无孔型亲水性聚合物基质为填充剂的疏水作用色谱柱。适用于蛋白质、单抗、酶等生物大分子的分离分析。由于和药物安全以及生产成本息息相关,对于重组蛋白药物(包括单抗)的非均一性分析变得越来越被重视。
  采用具有适度疏水性的填料,以含盐水溶液作流动相,借助于溶质与固定相间的疏水相互作用实现分离的色谱方法。其保留机理与反相色谱基本相同,所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相强,多为低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色谱主要用于蛋白质的分离与纯化。
  使用丁基疏水色谱柱时需要注意的事项:
  1、样品准备:确保样品溶解在适当的溶剂中,并进行充分的混匀。避免样品中存在杂质或固体颗粒,以防堵塞柱子。
  2、柱子条件:选择适当的柱子尺寸和填料粒径来满足所需的分离效果。通常,较小的填料粒径可以提供更好的分离效果,但也会增加柱子背压。
  3、流动相选择:丁基疏水色谱柱需要使用有机溶剂作为流动相的一部分。常见的有机溶剂包括甲醇、乙醇、乙腈等。根据待分离化合物的性质选择适当的流动相组合。
  4、温度控制:某些情况下,温度对于改善分离效果非常重要。可以通过升高或降低温度来调整选择性和峰形。
  5、柱子保护:在使用丁基疏水色谱柱时,建议在样品进样之前使用保护柱。保护柱通常是与分离柱相同的填料材料,但长度较短。它可以防止样品中的杂质堵塞和损坏分离柱。
  6、流速控制:选择合适的流速以获得理想的分离效果。过高的流速可能导致峰形变宽或峰形畸变。
  7、柱子维护:定期进行柱子的维护和清洗操作,以确保其性能和寿命。遵循制造商提供的指南和推荐。
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