超高效液相尺寸排阻色谱柱(UHPLC-SEC)是将尺寸排阻色谱的分离原理与超高效液相色谱系统相结合的新型分析工具。其核心在于采用了亚2微米(如2μm)或3μm的高性能球形硅胶填料,相较于传统SEC柱(通常5-10μm),能显著提升分离效率和分析通量。
该色谱柱严格遵循“分子筛效应”进行分离:分子量大的组分无法进入填料孔隙,优先洗脱;小分子则因深入孔道而滞留,从而实现基于流体动力学体积的精确分离。其突出优势在于高分辨率与高通量,以TSKgel UP-SW系列为例,2μm的粒径使其能在UHPLC系统上实现单克隆抗体单体与二聚体的高效分离,分析时间较常规HPLC柱大幅缩短。同时,其表面通常键合了亲水性二醇基或其他中性亲水基团,能最大限度减少对生物样品的非特异性吸附,保证蛋白、多肽等生物大分子的高回收率和良好峰形。
1、超高效分离能力
采用粒径为2μm的硅胶颗粒作为填料,结合超高效液相色谱(UHPLC)系统,可实现快速分离(如15cm规格柱)和高分辨率分析(如30cm规格柱)。其柱效显著高于传统HPLC色谱柱,能更精确地分离分子量差异较小的生物大分子(如小分子蛋白、多肽、寡核苷酸等)。
2、宽分离范围与高排阻限
分子量排阻限达500kDa,分离范围覆盖5-100 kDa,适用于从小分子蛋白到中型分子的分析需求。例如,可高效分离分子量在5万以下的多肽和小分子抗体(如Fab、scFv等)。
3、填料特性优化
填料表面键合二醇基,具有低非特异性吸附特性,减少样品损失,提高回收率。其孔隙容量和校正曲线斜率与TSKgel G2000SWxl相同,确保分析结果的可比性。
4、兼容性与灵活性
可兼容UHPLC和常规HPLC系统,但为充分发挥性能,建议使用死体积小(如管路体积、检测池体积小)的分析系统。提供两种规格(15cm和30cm),满足快速筛查与高精度分析的双重需求。
5、生物相容性与温和分离条件
固定相为多孔硅胶,分离过程不依赖化学作用力,仅基于分子尺寸差异,避免对生物大分子结构的破坏,适用于热不稳定或易降解样品的分离。
6、高灵敏度与低检测限
结合UHPLC系统的高流速和低扩散特性,可显著提升检测灵敏度,降低检测限,适用于痕量生物大分子的定量分析。
7、长柱寿命与稳定性
填料具有高化学稳定性和机械强度,耐受宽pH范围(2.5-7.5)和有机溶剂(如乙腈、甲醇),减少柱效衰减,延长使用寿命。
