凝胶渗透色谱仪是一种用于测定高分子材料分子量及其分布的高效液相色谱技术。它广泛应用于聚合物、生物大分子(如蛋白质、多糖)、合成树脂、涂料、橡胶及制药等领域的研发与质量控制。其工作原理基于分子在溶液中的流体力学体积差异。色谱柱内填充有多孔性凝胶颗粒,当样品溶液随流动相(通常为四氢呋喃THF、水或其他有机溶剂)流经色谱柱时,较小的分子可进入凝胶孔隙,路径更长,保留时间更久;而较大的分子被“排阻”在孔外,快速通过色谱柱。因此,不同分子量的组分按从大到小的顺序依次流出,实现分离。
1、样品处理
溶解:根据样品性质选择溶剂(如四氢呋喃、甲苯、DMF等),确保完q溶解。难溶样品可采用加热、搅拌或超声辅助,但需避免高温破坏样品结构(如蛋白质变性)。
过滤:使用0.2μm或0.45μm滤膜过滤样品,去除杂质和颗粒物,防止堵塞色谱柱。过滤时需注意滤膜材质与溶剂兼容性(如有机相用聚四氟乙烯滤膜,水相用尼龙滤膜)。
浓度控制:样品浓度通常为0.1%-1%,过高会导致色谱峰展宽或平头峰,过低则降低检测灵敏度。
2、流动相准备
选择:根据色谱柱类型和样品性质选择流动相,确保与检测器兼容(如示差折光检测器需避免使用挥发性溶剂)。
脱气:流动相需脱气处理(超声、真空或氦气鼓泡),防止气泡进入色谱柱影响分离效果。
纯度:使用HPLC级溶剂,避免杂质干扰或额外色谱峰出现。
3、仪器预热与检查
预热:开机后预热30分钟至1小时,使仪器达到稳定工作状态。
部件检查:确认泵、进样器、色谱柱、检测器等连接正常,无泄漏或松动。
废液瓶检查:及时更换废液瓶,防止溢出污染仪器。
