以下是针对尺寸排阻色谱(SEC)色谱柱的专业清洁方法总结，涵盖清洗原理、操作步骤及注意事项：
一、SEC色谱柱的污染类型与识别
1. 离子性吸附
- 表现：峰形拖尾、保留时间漂移。
- 原因：树脂基质中羧基带负电，与样品中阳离子结合。
2. 疏水性吸附
- 表现：压力升高、峰容量下降。
- 原因：苯环类化合物或疏水性蛋白吸附于填料表面。
3. 复合污染
- 特征：同时存在离子性和疏水性吸附，需联合清洗。
二、针对性清洗方法
(一)树脂基质色谱柱
1. 离子性污染清洗
- 溶剂选择：1 mol/L醋酸缓冲液(pH 4.0)或含0.5 mol/L NaCl的水溶液。
- 操作：以0.5 mL/min流速反向冲洗10–15倍柱体积。
2. 疏水性污染清洗
- 强效溶剂：PW·PL系列用50%甲醇，α/SuperAW系列用纯乙腈。
- 注意：逐步提高有机相比例，避免填料收缩变形[。
3. 顽固蛋白残留
- 特殊试剂：6–8 mol/L尿素溶液或0.2% Triton X-100表面活性剂。
- 风险提示：清洗后需彻洗，防止试剂残留影响后续分析。
(二)硅胶基质色谱柱
1. 碱性物质污染
- 酸性清洗：0.1%磷酸/乙腈混合液(pH 2.5–3.0)，冲洗5–10倍柱体积。
2. 疏水性物质污染
- 梯度洗脱：从10%甲醇逐步升至30%，避免盐析现象。
三、标准化清洗流程
1. 预处理
- 断开检测器连接，防止污染物进入流通池。
- 反接色谱柱(入口→出口方向反转)，降低筛板堵塞风险。
2. 分段冲洗
- 第一阶段：纯水或缓冲液冲洗10倍柱体积，去除水溶性杂质。
- 第二阶段：根据污染类型选择专用清洗剂，流速≤50%最大耐压值。
- 第三阶段：纯溶剂置换残留清洗剂，例如甲醇→水的梯度过渡。
3. 效果验证
- 测试标准品(如葡聚糖)的峰对称性和理论塔板数。
- 空白进样确认无鬼峰，表明污染物已清除。
四、关键注意事项
1. 流速控制
- 初始冲洗流速≤0.5 mL/min，逐步提升至正常分析流速。
2.溶剂兼容性
- 避免使用THF等强溶剂长期浸泡聚甲基丙烯酸酯填料。
- pH范围限制：硅胶基质需维持pH 2–8，防止结构溶解。
3. 灭菌与长期保存
- 短期存放(<7天)：150 mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0)。
- 长期封存：含0.05%叠氮化钠的20%乙醇溶液，抑制微生物生长。
五、预防性维护建议
1. 进样前过滤：使用0.22 μm滤膜去除颗粒物。
2. 定期再生：每完成100次分析后执行基础清洗程序。
3. 压力监控：当系统压力较初始值升高30%时启动深度清洗。
通过上述系统化维护策略，可显著延长SEC色谱柱使用寿命并保持分离性能稳定。
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