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C18反相色谱柱其使用是很有讲究的

更新时间:2025-02-03浏览:131次
  C18反相色谱柱的全称为C18色谱柱,其填料表面被修饰为含有18个碳原子的长链烷基(即C18烷基链),具有非极性性质。这种结构使得C18色谱柱在反相色谱中具有优异的分离性能。反相色谱柱通常采用非极性的载体(如硅胶)和偏极性的流动相(通常包含有机溶剂和缓冲液)进行分离。
  C18反相色谱柱的工作原理基于C18烷基链与待分离物之间的相互作用。当样品进入C18色谱柱时,非极性样品成分会与C18表面发生较强的相互作用,从而在柱床中停留的时间较长;而极性物质与C18之间的相互作用较弱,因此在柱床中停留的时间较短。通过调节移动相的组成、流速和温度等条件,可以控制待分离物与C18填料的相互作用,从而实现对样品的分离和定量分析。
  以下是C18反相色谱柱的操作事项:
  1、使用前
  检查与准备:取下柱头保护塞,确保流体在柱内顺利流动;检查柱压是否正常,若过高可能是柱子堵塞或杂质沉积。
  润洗与平衡:用合适的溶剂润洗,去除可能残留的保护液或有机溶剂;然后用流动相平衡,使柱内溶剂体系稳定,去除空气,确保基线平稳。
  流动相脱气:使用脱气后的流动相进行预处理和后续分析,避免气泡影响柱效和泵故障。
  温度控制:确保色谱柱及其周围环境维持在恒定温度,减少因温度变化引起的基线漂移和峰形变化。
  2、使用中
  流动相选择:pH值应控制在2-8之间,以免损坏柱子;注意溶剂的互溶性,防止发生盐析现象;若流动相中有盐类,先用水充分清洗,若是胺类添加到流动相中,要用特定混合溶剂冲洗。
  样品处理:样品溶液需经适当的前处理及过滤,以减少柱污染和堵塞;确认所选样品溶剂极性与运行条件一致,通常应选择与流动相相互兼容的溶剂。
  流速控制:根据柱内径选择合适的流速,如内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1ml/min左右;避免流速过高导致柱压过大,影响柱子寿命。
  3、使用后
  冲洗:完成分离分析后,及时对色谱分析系统进行冲洗,一般0.5h以上,以除去色谱柱内的杂质;如果样品为离子型,需要用10CV以上的溶剂冲洗,确保无残留。
  保存:长期闲置时,要将色谱柱彻d冲洗,建议冲洗10CV以上,保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液中。
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