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尺寸排阻色谱柱在使用时有什么技巧呢?

更新时间:2024-06-13浏览:189次
  尺寸排阻色谱柱是一种基于分子尺寸差异进行分离的高效色谱柱。基于多孔性凝胶作为固定相,利用分子在凝胶孔道中的排阻效应进行分离。在色谱柱中,大分子不能渗透到凝胶孔穴中去而被排阻,较早地流出色谱柱;中等体积的分子部分渗透;小分子则能够完q渗透入凝胶孔道内,最后流出色谱柱。因此,样品分子基本按其分子大小先后流出,从而达到分离的目的。
  尺寸排阻色谱柱的使用技巧:
  1、色谱柱的选择与准备
  选择正确的色谱柱:根据待测样品的性质和分子量范围选择合适的色谱柱。例如,对于分子量较大的样品,应选择具有较大排阻极限的柱子。
  色谱柱的储存与维护:在不使用时应将色谱柱存放在适当的有机溶剂中,如甲醇或乙醇,以防止微生物生长和色谱柱干裂。
  2、样品的准备
  样品溶解性:确保样品完q溶解在流动相中,避免样品在柱上沉淀或聚集。
  过滤与脱气:样品溶液应通过0.22微米或更小的滤膜过滤,并彻d脱气,以防止气泡影响色谱分析。
  3、流动相的选择与优化
  流动相组成:选择与样品化学性质兼容的流动相,常用的流动相包括水、盐溶液或有机溶剂等。
  流动相流速:调整适宜的流速,通常流速的增加可以缩短分析时间,但过高的流速可能引起柱效降低。
  4、系统的温度控制
  恒定温度:保持色谱系统在恒定的温度下运行,温度波动可能会影响色谱峰的形状和分离度。
  5、检测器的正确设置
  选择合适的检测器:常用的检测器有折射率检测器和紫外吸收检测器。选择时应考虑样品的化学性质和检测灵敏度需求。
  检测器灵敏度:适当调节检测器的灵敏度,以获得清晰可辨的色谱峰而不至于过载。
  6、数据分析与处理
  校准曲线的建立:使用一组已知分子量的标样来建立校准曲线,这对于准确测定未知样品的分子量至关重要。
  数据处理软件:利用专业的数据处理软件进行数据收集和分析,可以有效提高数据处理的准确性和效率。
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