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【技术分享】参照USP129修订案建立单克隆抗体的SEC-UHPLC分析方法

更新时间:2024-04-01浏览:175次

继USP621修订版生效之后,美国药典又于2023年5月在PF49(3)中提议对通则<129治疗性重组单克隆抗体药物的分析方法(Analytical Procedures for Recombinant Therapeutic Monoclonal Antibodies) 进行修订:针对用于蛋白质SEC分析的L59型色谱柱,增加超高速、高性能的UHPLC色谱柱,即补充了单克隆抗体的SEC-UHPLC的分析方法。经过开放评议后,本次修订案作为USP-NF2024, Issue 3, 于2023年12月1日正式公布。如表1所示,对原有的L59型色谱柱尺寸(30 cm)增加了UHPLC专用的30 cm色谱柱。

表1. L59型色谱柱同时收录了TSKgel G3000SWXL和TSKgel UP-SW3000

图1.png


一、从SEC-HPLC转换为SEC-UHPLC时的条件变更


USP中规定了使用L59型色谱柱分析抗体的多聚体、单体和片段。其中,比较有代表性的是将TSKgel G3000SWXL(5μm, HPLC)转换为TSKgel UP-SW3000-LS(2μm,UHPLC) 。除此以外,还可以将用于分离抗体片段的TSKgel G2000SWXL色谱柱转换为TSKgel UP-SW2000。将用于分离多聚体的TSKgel G4000SWXL(8μm)转换为TSKgel UP-SW Aggregate(3μm),分析条件的变更请参照表2。

表2.从HPLC色谱柱转换为UHPLC色谱柱时分离条件的变更

图2.png


二、单克隆抗体的SEC-UHPLC分析实例

 

图1是在分析单克隆抗体时,从30cm的G3000SWXL色谱柱转换为15 cm的UP-SW3000-LS色谱柱,在保持同等分离度的前提下,分析时间缩短为50%,流动相减少约80%


图3.png

图1. SEC-HPLC (30 cm色谱柱) 转换为SEC-UHPLC (15 cm色谱柱) 的分离例


有时为了提高分离度会串联2支30cm的SEC-HPLC色谱柱进行分析,这种情况下,可转换为使用30cm的SEC-UHPLC色谱柱进行分析,也能期待同样的缩减效果(图2)。


图4.png

图2.SEC-HPLC(30cm色谱柱×2支) 转换为SEC-UHPLC (30 cm色谱柱) 的分离例


如果您有色谱柱使用或维护保养方面的任何问题,欢迎联系东曹技术中心。







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