服务热线:
021-34610856
技术支持

您现在的位置:首页  >  技术文章  >  【技术分享】SEC分析中样品吸附的改善——流动相及色谱柱应对策略

【技术分享】SEC分析中样品吸附的改善——流动相及色谱柱应对策略

更新时间:2023-12-05浏览:475次

使用尺寸排阻色谱法(SEC)分离生物大分子时,有时会发生因样品吸附在色谱柱上,而导致色谱图变化或出现异常洗脱峰的现象。该现象往往是样品的疏水性和静电作用引起,有时在分离时反映为色谱柱间差异。为解决这类问题,可以通过向流动相中添加各种试剂来抑制吸附,以实现正常的SEC分离。

我们汇总了可以抑制样品与色谱柱之间相互作用的试剂种类,并归纳了不同SEC流动相改善色谱分离效果的示例。希望能给大家的分析工作提供参考。

一、可添加试剂的种类及效果

二、不同SEC流动相的改善示例

下表是按照样品分类归纳了SEC流动相对样品吸附、相互作用的改善示例。虽然在出现静电相互作用时,向流动相中添加盐便可抑制,在发生疏水相互作用时,选择哪种添加试剂是非常重要的。

另外,由于添加试剂可能会导致生物大分子的结构发生显著变化、失活或变性,因此需要特别注意。

三、色谱柱的老化处理

在SEC色谱柱的使用初期,常会出现蛋白质多聚体等物质吸附于色谱柱的现象。防止该现象的对策是可以对色谱柱进行老化处理(预处理)。


01
色谱柱老化处理示例1:

将目标样品(相对含有较多多聚体的情况)重复进样5~10次,然后进行清洗。
02
色谱柱老化处理示例2:

将市售的人血清(10 g/L、过滤样品)重复进样5~10次,然后进行清洗。


请在色谱柱的老化处理后分析目标样品,确认多聚体等物质的洗脱峰面积已经稳定。不过,色谱柱的老化处理是最后的办法,建议大家尽量去找到合适的流动相以抑制吸附。如果您有色谱柱使用或维护保养方面的任何问题,欢迎联系东曹技术中心。



东曹(上海)生物科技有限公司 版权所有    备案号:

技术支持:化工仪器网    管理登陆    网站地图

咨询热线:
021-34610856

微信服务号