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层析柱的使用方法

更新时间:2023-06-26浏览:672次
层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。凝胶过滤层析是利用一定大小孔隙的具有网状结构的凝胶作层析介质(如葡聚糖凝胶、琼脂 糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等),根据被分离物质的分子大小、形状不同扩散到凝胶孔隙内的速度不同,因而通过层析柱的快慢不同而分离的一种层析法。下面来介绍一下层析柱的使用方法。
 
1.填装之前,检查层析柱各接头、部件不能有破损漏气,并将层析柱清洗干净,壁上不要有残留小颗粒,会影响层析效果。
2.确保填料、层析柱、所有的缓冲液以及样品温度一致,温度不一致容易导致产生气泡。
3.所有过柱子的液体(包括水、平衡缓冲液、洗脱缓冲液、再生溶液)用0.45um滤膜抽滤,并进行超声脱气,注意填料不可超声脱气。
4.将填料用纯水清洗几遍,洗掉保存液,并将上层的细小颗粒弃去。
5.关闭层析柱出水口,玻璃棒引流往层析柱内倒入约1/4柱体积的水(或缓冲液),务必使底端无气泡。
6.将填料用玻璃棒搅匀成悬浆,用玻璃棒引流,均匀的一次性倒入柱子内,注意务必不要产生气泡,待柱子内填料稳定,打开出液管,使凝胶在柱内自由沉降。
7.如果是手动操作,将柱子用纯水冲几个柱体积,使柱床稳定。
如果仪器操作,用逐渐加大流速的方法,将填料压实,注意:既不能过松,也不能过紧,要注意不能超过填料的耐压。
8.上样前,样品要进行离心或者用0.45um滤膜过滤。
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