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疏水色谱柱正确的安装步骤是如何的!

发布时间:2021-05-13浏览:220次
   疏水色谱柱能够有效分离抗体的结构同分异构体。在抗体药物中,对于一些由于等电点相同而无法通过离子交换色谱法实现分离的,但表面疏水性有差异的结构同分异构体、或多聚体,可以考虑使用疏水色谱法来进行分析。并且疏水色谱法也可以用于抗体降解产物的分析。
  疏水色谱柱安装的正确步骤如下:
  1、使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统,确保系统干净,不含任何缓冲盐和污染物。
  2、取用色谱柱时避免磕碰掉落。
  3、将疏水色谱柱入口端连接到系统上,柱出口端先不要连接,色谱柱身上有箭头标明正确流向。
  4、在0.1mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱,然后在2分钟内将流速升至0.5mL/min。
  5、当溶剂均匀的从柱出口端流出,停流速,将色谱柱出口端接到系统检测器上(这样可以避免气泡进入检测系统,并且可快速达到基线平衡)。
  6、重启流速,按照步骤4的方法逐渐提高流速,至常规分析时所使用的流速。
  7、参考柱效测试报告中的方法,使用该流动相条件平衡色谱柱,通常需要使用5-10倍柱体积的流动相,直至压力与基线稳定。
  8、测试疏水色谱柱柱效。如果没有柱效测试报告中的分析物,请厂家部门寻求支持,使用合适的浓度与进样量。柱效结果略低于柱效测试报告属正常情况。如结果明显偏低、峰形拖尾,提示色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态,需要进行故障排查。当使用2.1mm内径色谱柱时,建议优化系统以减少谱带展宽,包括:使用检测器微量流通池,减少进样器loop环体积,使用较小内径(如0.005''或0.12mm)的系统管路。并确保管路与疏水色谱柱连接恰当、无死体积。
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