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发布时间:2018/3/30   点击次数:149次

色谱是一种分离分析手段,分离是核心,因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好,分析速度快等。

 

影响色谱柱性能因素有:

 

一、物理因素:

 

(1) 硅胶纯度:硅胶纯度和残留金属离子浓度,硅胶的杂质会影响化合物的峰形,硅胶表面的金属含量高会影响碱性化合物的峰形,易发生拖尾。

(2) 色谱柱尺寸填料床的长度和内径,增加色谱柱长度,可以在一定程度上提高柱效,但也会升高压力和导致峰展宽;宽柱径,提高载样量,但也会增加横向扩散,同样会导致峰展宽。窄柱径可以节约溶剂,可减少横向扩散,但压力较大,对系统要求较高。

(3) 颗粒形状及粒径球形颗粒柱效高、重现性好、柱床结构均匀,不规则形柱床结构不均匀、流动相线速度不均匀,容易谱带展宽;平均颗粒直径,粒径越小,柱效越高,柱压也越高。粒径分布越广则柱效越低,压力越大。

(4) 颗粒表面积:颗粒外表面和内部孔表面的总和,以m2/g表示,相对而言高表面积对样品具有较强的保留能力,更大的柱容量和分离度。而低表面积能更快达到平衡状态,更适合梯度洗脱程序。

(5) 孔径:颗粒的孔或腔的平均尺寸,范围是80~300?,大孔径的填料颗粒可以延长大分子溶质在填料表面的滞留时间,改善分离,所以大孔径填料适合分离大分子化合物或者水动力体积较大的分子。

 

二、化学因素:

 

(1) 键合类型及键合相:键合相分子与基体单点相连为单体键合,这种键合方式可以提高传质速率,缩短柱平衡时间,;聚合体键合为键合相分子与基体多点相连,这种键合方式可以增加色谱柱稳定性,增加载样量。而键合相不同会直接影响化合物的保留行为。

(2) 碳覆盖率:高碳覆盖率可以提高分辨率和重现性,但分析时间长。

(3) 封端:硅胶键合相填料中有部分未封端的残留硅羟基,如图封端可以减轻待测组分与硅胶表面残留的酸性硅羟基反应,改善保留和峰行,这对于碱性化合物尤其重要。而不同的封端技术也会直接影响色谱柱的效能。

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