尺寸排阻色谱柱的再生方法有哪几种？

尺寸排阻色谱柱（SEC）是根据蛋白的分子量大小进行分离的一种色谱柱，采用的是多孔硅胶填料，分子量小的物质能够进入到硅胶孔内，走的路程多，分子量大的物质被排阻在硅胶孔外，走的路程少。于是分子量大的物质先流出，分子量小的物质后流出，通过这种方法就可以将蛋白分离开了。

 

SEC色谱柱一般使用缓冲盐作为流动相，常用的是PBS（磷酸盐缓冲液），相对于其他种类色谱柱，SEC色谱柱的寿命是比较短的。在使用久了以后会产生拖尾，或者峰展宽的情况，这时候我们可以对SEC色谱柱进行再生清洗。一般再生的方法有几种，可以根据需要结合起来使用：

 

1.10%-20%甲醇低流速（正常流速的30%）冲洗15-20个CV（柱体积，column volume）

 

2.0.25M Na2SO4或者NaCl冲洗5CV，纯水冲洗5CV，交替冲洗2次。

 

3.5%异丙醇（IPA）冲洗5CV，冲洗过程中可以满环进样6M盐酸胍或者8M尿素，确保色谱柱上残留蛋白的变性。