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尺寸排阻色谱柱的再生方法有哪几种?

发布时间:2022-07-21浏览:95次
尺寸排阻色谱柱(SEC)是根据蛋白的分子量大小进行分离的一种色谱柱,采用的是多孔硅胶填料,分子量小的物质能够进入到硅胶孔内,走的路程多,分子量大的物质被排阻在硅胶孔外,走的路程少。于是分子量大的物质先流出,分子量小的物质后流出,通过这种方法就可以将蛋白分离开了。
 
SEC色谱柱一般使用缓冲盐作为流动相,常用的是PBS(磷酸盐缓冲液),相对于其他种类色谱柱,SEC色谱柱的寿命是比较短的。在使用久了以后会产生拖尾,或者峰展宽的情况,这时候我们可以对SEC色谱柱进行再生清洗。一般再生的方法有几种,可以根据需要结合起来使用:
 
1.10%-20%甲醇低流速(正常流速的30%)冲洗15-20个CV(柱体积,column volume)
 
2.0.25M Na2SO4或者NaCl冲洗5CV,纯水冲洗5CV,交替冲洗2次。
 
3.5%异丙醇(IPA)冲洗5CV,冲洗过程中可以满环进样6M盐酸胍或者8M尿素,确保色谱柱上残留蛋白的变性。
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